Po pierwsze, zarówno EcoR1, jak i Xba1 pozostawiają nawisy 5' podczas trawienia DNA (podobnie jak Nde1). W obu przypadkach koniec 3' jest zagłębiony, dlatego poliermasa może dodawać zasady. Po drugie, wszystkie polimerazy mogą dodawać zasady tylko do końca 3', więc Klenow doda 4 zasady do cofniętego końca 3' obu miejsc, aby wygenerować tępe końce.
Czy enzymy restrykcyjne pozostawiają 5 fosforanów?
Wektory i wstawki trawione enzymami restrykcyjnymi zawierają niezbędne modyfikacje końcowe (5' fosforan i 3' hydroksyl), podczas gdy fragmenty utworzone w reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) mogą nie.
Czy tępe końce można podwiązać?
Podwiązanie tępych końców
Podwiązanie tępych końców nie wymaga parowania wystających końców, więc każdy tępy koniec może być podwiązany z innym tępym końcem. Tępe końce mogą być generowane przez enzymy restrykcyjne, takie jak SmaI i EcoRV.
Czy polimeraza Taq powoduje tępe końce?
Tak… Taq Polymerase dodaje A-Overhangs, jeśli utrzymasz końcowy etap wydłużania w temperaturze 72 dC w PCR. Używany głównie do klonowania TA.
Dlaczego używać fragmentu Klenowa w sekwencjonowaniu DNA?
Fragment Klenowa jest niezwykle przydatny do zadań badawczych, takich jak: Synteza dwuniciowego DNA z jednoniciowych szablonów . Wypełnianie cofniętych 3' końców fragmentów DNA w celu stępienia 5' nawisu . Odtrawianie wystających 3' nawisów.
