Gdy komórki wydają się odłączone, dodaj 2 objętości wstępnie ogrzanej, pełnej pożywki wzrostowej, aby zdezaktywować trypsynę. Delikatnie rozprowadź pożywkę przez kilkukrotne pipetowanie powierzchni warstwy komórek, aby zapewnić odzyskanie >95% komórek.
Jak zatrzymać aktywność trypsyny?
Trawienie trypsyną można zatrzymać przez zamrożenie lub obniżenie pH reakcji poniżej pH 4 przez dodanie kwasu mrówkowego, octowego lub trifluorooctowego (trypsyna odzyska aktywność, gdy pH podnosi się powyżej pH 4). Wytrawione próbki można przechowywać w temperaturze -20°C.
Co neutralizuje trypsynę?
Bufor zawierający jony wapnia i magnezu również spowolni aktywność trypsyny. FBS jest jednak bardziej skutecznym sposobem hamowania aktywności trypsyny.
Czy surowica dezaktywuje trypsynę?
Surowica dezaktywuje resztki trypsyny, pozostałe po enzymatycznym trawieniu nerek i enzymach proteolitycznych, które są następnie syntetyzowane przez komórki. Świeżo trypsynizowane komórki można było hodować do pojedynczych warstw przy braku surowicy, pod warunkiem, że były wielokrotnie płukane w celu usunięcia pozostałości trypsyny.
Ile mediów potrzeba, aby dezaktywować trypsynę?
Dopóki używasz co najmniej stosunku 1:1 5-10% podłoża zawierającego surowicę z twoją trypsyną, hamowanie powinno być więcej niż wystarczające, po czym następuje odwirowanie i wymianę pożywki na świeże pożywkę.