Inkubuj naczynie w temperaturze pokojowej przez 2-3 minuty . Mocno przylegające komórki można szybko odłączyć w temperaturze 37 °C. Obserwuj komórki pod mikroskopem. Oderwane komórki wydają się zaokrąglone i refrakcyjne pod mikroskopem.
Co się stanie, jeśli zbyt długo trypsynujesz komórki?
Inkubowanie komórek ze zbyt wysokim stężeniem trypsyny przez zbyt długi czas uszkodzi błony komórkowe i zabije komórki. Jeśli nie masz pewności co do stężenia trypsyny do użycia, użyj niskiego stężenia.
Jak trypsynizować komórki?
Komórki mogą być ponownie zawieszone przez delikatne pipetowanie zawiesiny komórek w celu rozbicia grudek. W razie potrzeby można wykonać dalsze rozcieńczenie w celu zliczenia komórek i/lub podhodowli.
Jak długo trwa przyłączenie komórek?
pierwsze komórki dołączają już po 3-5 min! Z mojego doświadczenia wynika, że większość EC została dołączona po 10-20 minutach. Ale im dłużej czekasz, tym mocniejsze jest przywiązanie.
Czy trypsynizowanie komórek dwa dni z rzędu jest złe?
Tak, to jest szkodliwe, jeśli trypsynujesz swoje komórki nieprzerwanie po 24 godzinach podziału. Wskazane jest przeprowadzanie podziału po 48 godzinach podziału. … Możesz utrzymać komórki do czasu, gdy ich morfologia będzie dobra (w zależności od typu komórki, niektóre komórki mogą przejść do 80 pasaży, a inne do 10).
