Możesz również odsolić próbkę przez ultrafiltrację do 1 dziesiątej poprzedniej objętości, która ponownie rozrzedzi się i powtórzy krok UF. Najlepszą metodą odsalania jest odsalanie przez filtrację żelową wobec 50 mM buforu, a następnie ultrafiltrację (klasyczną, nie odśrodkową).
Co to jest odsalanie w oczyszczaniu białek?
Odsalanie jest stosowane do usuwania soli z roztworów białek, fenolu lub niewłączonych nukleotydów z kwasów nukleinowych lub nadmiaru odczynników sieciujących lub znakujących ze sprzężonych białek.
Jak oczyszczasz białka?
Podczas oczyszczania białek masowych, powszechnym pierwszym krokiem do izolowania białek jest strącanie za pomocą siarczanu amonu (NH4) 2SO4. Odbywa się to poprzez dodawanie coraz większych ilości siarczanu amonu i zbieranie różnych frakcji wytrąconego białka. Następnie siarczan amonu można usunąć za pomocą dializy.
Jak buforować białka wymiany?
Wymiana buforu jest jednak przeprowadzana przez pierwsze zrównoważenie żywicy z kolumny z buforem, w którym powinna znaleźć się próbka. W obu przypadkach składniki buforu przenoszące próbkę do kolumna zostanie zastąpiona roztworem, którym kolumna została wstępnie zrównoważona.
Którą z poniższych technik chromatograficznych można zastosować do odsalania białek?
Jak wspomniano powyżej, filtracja żelowa może być skutecznie wykorzystana do białkaodsalanie i jest osiągane przez zrównoważenie kolumny do filtracji żelowej wodą. Jednak wymianę buforu przeprowadza się najpierw równoważąc żywicę kolumny z buforem docelowym.
